qPCR

La PCR (Polymerase Chain Reaction ou réaction en chaîne par polymérase) en temps réel, aussi appelée PCR quantitative ou qPCR, est une méthode rapide, sensible et spécifique pour la détection et la quantification des acides nucléiques d’un agent pathogène (virus, bactérie, parasite…) et pour la détermination de mutations géniques en cancérologie (KRAS, BRAF, EGFR, ALK, etc.).

Noveox peut dans certains cas faire appel à la technologie qRT-PCR (quantitative Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction), consistant en l’amplification d’un fragment d’ARN par reverse transcription puis PCR en temps réel, permettant la détection et la quantification de la cible ARN. La détection de l'ARN d'un germe est significative de sa viabilité.

qPCR Technology
qPCR Technology
Après isolation de l’ADN, les séquences géniques cibles sont amplifiées (amplicons) et, si elles sont présentes, sont détectées au moyen de sondes pour hydrolyse fluorescentes. L’intensité du signal de fluorescence émis est proportionnelle avec la quantité d’amplicons.

ATPmétrie

L'ATPmétrie est une technique de biologie, basée sur une réaction chimique de bioluminescence, qui mesure la quantité d'adénosine triphosphate (ATP) dans un échantillon.

L'adénosine triphosphate (ATP) est la principale énergie intermédiaire requise dans la plupart des réactions du métabolisme cellulaire. C'est un produit du métabolisme cellulaire synthétisé dans des organites spécifiques appelés mitochondries que l'on trouve chez les eucaryotes et les procaryotes.

Chaque cellule vivante produit et consomme de l'ATP. Cette coenzyme, spécifique aux milieux de vie, est la preuve de l'existence d'organismes vivants.

ATP Technology
qPCR Technology
qPCR Technology

Dans un échantillon biologique, quantifier l'ATP équivaut à quantifier les micro-organismes totaux (ou la biomasse totale). Pour réaliser ce type de dosage, on mesure la lumière émise par la réaction enzymatique de bioluminescence utilisant la luciférine et la luciférase de luciole.

L'ATP, en présence d'un complexe luciférine / luciférase et d'un catalyseur, libère de l'énergie sous forme de lumière. En mesurant la quantité de lumière émise à l'aide d'un luminomètre, on en déduit la quantité d'ATP. La méthode de mesure ATPmétrie est un test de terrain dont le résultat est obtenu en quelques minutes.

NGS

Le séquençage nouvelle génération (new generation sequencing, ou NGS), également connu sous le nom de séquençage à haut débit, constitue la révolution biotechnologique de ces dernières années, en permettant de séquencer de grands fragments d'ADN en des temps records.

La technologie NGS peut être utilisée pour séquencer l'ADN de n'importe quel organisme (métagénomique), fournissant des informations précieuses en réponse à presque n'importe quelle question biologique. En tant que technologie hautement évolutive, le séquençage de l'ADN peut être appliqué à de petites régions ciblées ou à l'ensemble du génome dans le cadre de l’oncologie moléculaire tissulaire et ADN Circulant.

NGS Technology
qPCR Technology
qPCR Technology

La technologie NGS repose sur 3 étapes :

  • La préparation de banques : les banques sont créées en utilisant une fragmentation aléatoire de l'ADN suivie de la liaison avec des petites séquences spécifiques,
  • L'amplification : la banque est amplifiée grâce à des méthodes d'amplification clonale et de PCR,
  • Le séquençage : l'ADN est séquencé en utilisant différentes approches en fonction de la technologie utilisée